レンチウイルスの作製＆遺伝子導入の簡略化ポイント！

レンチウイルスの作製・遺伝子導入はプロセスが複雑だったり時間がかかったりで大変だと思っていませんか？

今回は、そんなレンチウイルスの作製・遺伝子導入のワークフローを理解し、簡略化を行った効率的なプロセスをご紹介します！

レンチウイルス作製・遺伝子導入の手順＆簡略化ポイントのご紹介

レンチウイルスベクター作製のワークフローは、以下の5つのステップからなります。

1. ベクター選択と遺伝子クローニング
まず、目的の遺伝子をクローニングするための適切なレンチウイルスベクタープラスミドを選びます。
ベクターは、異なるプロモーターを持つもの、蛍光タンパク質が搭載されたものなどがあるので標的細胞や実験目的にあったものを選びます。
次に、目的の遺伝子をベクターにクローニングします。 2. トランスフェクションとウイルスの産生
目的の遺伝子を含むベクタープラスミドと、ウイルス産生に必要なウイルス遺伝子を発現するプラスミドを混合したパッケージング試薬（Lentiviral High Titer Packaging Mix）を、パッケージング細胞（Lenti-X™ 293T Cell Line）にコトランスフェクションすることで、培養上清中からウイルスが回収できます。

3.タイター測定
ウイルスを回収した後、最適な多重感染度（MOI）を設定するために、作製したウイルスのタイターを測定することが大切です。
レンチウイルスのタイター測定は、ELISAまたはqRT-PCRベースのタイター測定キット、フローサイトメトリーなどで行います。
もっと知りたい方はこちらを参照してください。 4. 濃縮／精製
タイターによっては、レンチウイルス上清を濃縮する必要があります。 レンチウイルス濃縮試薬（ Lenti-X Concentrator）を使用すると、簡単な操作でレンチウイルス上清を最大100倍まで濃縮することができます。 感受性の高い細胞にレンチウイルスを導入する場合は、精製試薬（Lenti-X Maxi Purification Kit）を使用すると、ウイルス感染を阻害する不純物を除去することができます。

5. ターゲット細胞への感染
ウイルス粒子をターゲット細胞に導入します。このステップが最も重要であり、レンチウイルス実験に慣れていない場合は習得が難しいかもしれませんが・・・
このステップでおすすめなのが、遺伝子導入用のスポンジ(Lenti-X Transduction Sponge）を使用する方法です。
スポンジの微細な流路構造の中で細胞とウイルスが局在することで、難しい遠心感染法や細胞への影響が懸念される導入促進剤を用いることなく効率的に遺伝子導入できます。

ターゲット細胞への感染までのステップが完了したら、宿主ゲノムにターゲット遺伝子が組み込まれたかをPCR、ウェスタンブロッティング、挿入部位同定キットなどを用いて解析し、レンチウイルスの遺伝子導入が成功したかどうかを確認します。

まとめ

簡略化されたワークフローによってレンチウイルス実験の時間を節約できれば、下流の実験に集中することもできますね。
レンチウイルスを作製したことが無い方も、ぜひチャレンジしてみてください！ サンプル請求ができる製品もありますので、ご興味のある製品がございましたら、こちらからぜひお試しください。