知って得する実験のコツ　＜その4＞ DNA Ligation Kitで形質転換効率が悪いときに注意する点は？

・ライゲーション反応時間を延長してください。（overnightまで延ばしてください。）

・DNA 溶液の塩濃度が高いとライゲーション効率が低下します。
特にエタノール沈澱時の酢酸アンモニウム塩は阻害作用を示します。
エタノール沈澱の塩が残らないよう、洗浄操作を行ってください。　

・インサートDNAやベクターをアガロースゲルから切り出して精製する際、UV 照射によりDNA が損傷を受けます。
DNAへのUV 照射時間をできるだけ短くして素早く操作を行ってください。

　また、アガロースゲルからのDNA 抽出キットで、カラムからの抽出液をそのままライゲーションに使用できるキットの場合、抽出液をさらにエタノール沈澱し、バッファー交換することでライゲーション効率が改善する場合があります。

DNA Ligation Kit ＜Mighty Mix＞
https://catalog.takara-bio.co.jp/product/basic_info.php?unitid=U100004426

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https://catalog.takara-bio.co.jp/product/basic_info.php?unitid=U100009330